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酸性磷酸酶（Acid Phosphatase ，ACP） 活性測定試劑盒

商品貨號：QS2001
英文名稱：Tissue and Blood Acid Phosphatase（ACP）Assay Kit
別名：組織及血液酸性磷酸酶試劑盒 ACP Kit 組織及血液酸性磷酸酶（ACP）試劑盒
檢測方法：常量法

• 產品詳細介紹
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• 產品說明書

測定意義：                           

ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機磷酸，常見于巨噬細胞的溶酶體內。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。

測定原理：

在酸性環境中，ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚，苯酚與4-氨基安替和六氰合鐵酸鉀反應生成紅色亞醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通過測定510nm吸光度增加速率，來計算ACP活性。

貨號: QS2001              規格：50管/24樣

酸性磷酸酶（acid phosphatase ，ACP） 活性測定試劑盒說明書

       可見分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

ACP 在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機磷酸，常見于巨噬細胞的溶酶體內。ACP 常用 于前列腺癌的輔助診斷。

測定原理：

在酸性環境中，ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚，苯酚與 4-氨基安替和六氰合鐵酸鉀反應生 成紅色亞醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通過測定 510nm 吸光度增加速率，來計算 ACP 活 性。

自備實驗用品及儀器：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1 瓶，4℃避光保存，變成藍綠色不能使用。

標準品：液體×1 支，2μ mol/mL 酚標準液，4℃保存。

粗酶液提取：

1. 組織：

按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加 入 1mL 試劑一）進行冰浴勻漿，4℃、8000g 離心 10min，取上清液待測。

2. 細菌或細胞：

按照細菌或細胞數量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建 議 500 萬細胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒， 總時間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

測定：

1.分光光度計預熱 30 min，調節波長到 510 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑二置于 37 o C 水浴中預熱 30 min。

3. 空白管：取 EP 管，加入 20μ L 蒸餾水，200μ L 試劑二，200μ L 試劑三，混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min；加入試劑四 600μ L，混勻后于 510 nm 測定吸光度，記為 A 空白管。

4. 標準管：取 EP 管，加入 20μ L 標準品，200μ L 試劑二，200μ L 試劑三，混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min；加入試劑四 600μ L，混勻后于 510 nm 測定吸光度，記為 A 標準管。

5. 對照管：取 EP 管，加入 20μ L 上清液，200μ L 蒸餾水，200μ L 試劑三，混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min；加入試劑四 600μ L，混勻后于 510 nm 測定吸光度，記為 A 測定管。

6. 測定管：取 EP 管，加入 20μ L 上清液，200μ L 試劑二，200μ L 試劑三，混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min；加入試劑四 600μ L，混勻后于 510 nm 測定吸光度，記為 A 測定管。

注意：空白管和標準管只需做一次。每個測定管設一個對照管。

ACP 活性計算：

1. 血液中 ACP 活性計算

活性單位定義：37℃中每毫升血液每分鐘催化產生 1μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。

ACP 活力(μ mol/min/mL)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反總] ÷V 樣÷T = 6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)

2. 組織、細菌或細胞中 ACP 活性計算

（1）按照蛋白濃度計算 活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產生 1 μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。

ACP(μ mol/min/mg prot)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反總] ÷(Cpr×V 樣)÷T =6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷Cpr

（2）按照樣本質量計算 活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產生 1 μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。

ACP (μ mol/min/g 鮮重)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反總] ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T = 6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷W

（3）按照細菌或細胞數量計算

活性單位定義：37℃中每 10⁴個細菌或細胞每分鐘催化產生 1 μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。

ACP (μ mol/min/10⁴ cell)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反總] ÷(細胞數量×V 樣÷V 樣總)÷T = 6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷細胞數量

C 標準品：2μ mol/mL；V 反總：反應體系總體積（mL），1020μ L=1.02 mL； V 樣：加入反應 體系中上清液體積（mL），0.020mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間（min），15 min。

注意事項：

1、試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。

2、試劑四變藍綠色后不能再使用。

3、加入試劑四后必須立即混勻，否則顯色不*。

4、ACP 不穩定，尤其在 37℃和 pH 大于 7 的條件下活力喪失快，因此酸性磷酸酶樣品一般需當 天準備；血清樣品中，每毫升血清中加入 10mg 檸檬酸氫二鈉或者 5mg 硫酸氫鈉，使 pH 降 至 6.5 以下，或 5ml 血清加入 30%醋酸溶液 2～3 滴，置于 4℃可保存 1 周。

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