你知道什么是轉(zhuǎn)染試劑么？一起來看看吧
更新時間：2022-07-05 | 點(diǎn)擊率：3243
轉(zhuǎn)染(transfection)指真核細(xì)胞由于外源DNA摻入而獲得新的遺傳標(biāo)志的過程。DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)的發(fā)展對現(xiàn)代分子生物學(xué)產(chǎn)生了巨大的影響。
基因轉(zhuǎn)染技術(shù)不僅是研究轉(zhuǎn)基因和基因表達(dá)的重要工具，而且是目前基因治療的關(guān)鍵步驟。理想的基因轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)該具有如下特點(diǎn):高效轉(zhuǎn)染;安全;低細(xì)胞毒性;方法簡單;省時、經(jīng)濟(jì)。
哺乳動物的轉(zhuǎn)染技術(shù)在60年代末70年代初即已引入。
目前，將外源DNA 導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞的方法大致可分為兩大類，即生物方法和物理化學(xué)方法。物理化學(xué)方法中常用的有磷酸鈣法、顯微注射、電穿孔、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，以及最近出現(xiàn)的以高分子聚合物為載體的基因傳遞技術(shù)。
生物方法則主要是以病毒作為載體,通過病毒感染的方式將外源DNA 導(dǎo)入到細(xì)胞中, 其中以逆轉(zhuǎn)錄病毒及腺病毒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)尤為常用。
其中病毒載體的特點(diǎn)是整和效率高, 可使外源基因在宿主細(xì)胞中長期表達(dá)，缺點(diǎn)是存在潛在的安全危險性。電穿孔法及顯微注射法的特點(diǎn)是轉(zhuǎn)染率較高，缺點(diǎn)是需要昂貴的儀器，前者對細(xì)胞的損傷較大，后者在導(dǎo)入DNA 時需要一個細(xì)胞一個細(xì)胞地注射，不適合大量細(xì)胞研究的需要。
磷酸鈣在良好的轉(zhuǎn)染條件下，可以在293T等細(xì)胞的轉(zhuǎn)染達(dá)到較高的轉(zhuǎn)染效率。但磷酸鈣轉(zhuǎn)染有一個突出的問題，非常不穩(wěn)定，尤其受PH值的影響非常大，在實驗中使用的每種試劑都必須小心校準(zhǔn)，保證質(zhì)量，因為甚至偏離*條件十分之一個PH都可能導(dǎo)致磷酸鈣轉(zhuǎn)染的失敗，經(jīng)常即使最熟練的轉(zhuǎn)染實驗者也不能保證磷酸鈣轉(zhuǎn)染的成功，他們可能經(jīng)常為莫名其妙的轉(zhuǎn)染失敗而沮喪。
同時，他們還經(jīng)常發(fā)現(xiàn)，往往小體積的轉(zhuǎn)染比如6孔板以下的轉(zhuǎn)染效果比較理想，可一換到大皿，經(jīng)常轉(zhuǎn)染效率下降很快。磷酸鈣的先天缺陷往往是實驗梗阻的主要原因。