常用的細(xì)胞凋亡

檢測(cè)方法匯總（二）

細(xì)胞凋亡檢測(cè)對(duì)探究相關(guān)機(jī)制意義重大，本文主要介紹DNA片段化、線(xiàn)粒體及溶酶體檢測(cè)三個(gè)方面。細(xì)胞凋亡時(shí)，染色質(zhì)DNA會(huì)規(guī)律性斷裂，形成180-200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳能觀察到 “梯狀" 條帶，TUNEL法可標(biāo)記斷裂DNA末端，實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測(cè)及細(xì)胞定位。線(xiàn)粒體在凋亡調(diào)控中作用關(guān)鍵，凋亡時(shí)膜電位改變，使用JC-1等熒光探針，依據(jù)熒光強(qiáng)度變化可知線(xiàn)粒體功能狀態(tài)。溶酶體檢測(cè)可利用溶酶體熒光探針，其熒光特性會(huì)隨溶酶體膜通透性改變而變化；檢測(cè)溶酶體相關(guān)酶如組織蛋白酶的活性，同樣能反映細(xì)胞凋亡情況。這些方法從不同層面助力細(xì)胞凋亡研究。

本文分享了常見(jiàn)的幾種細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法，讓我們一起學(xué)習(xí)一下吧~

01

DNA片段化

細(xì)胞凋亡晚期，細(xì)胞核碎裂呈現(xiàn)片段化的DNA。熒光/生物素標(biāo)記的dUTP在TdT酶的介導(dǎo)下與碎片化DNA暴露的-3'OH末端結(jié)合，原位檢測(cè)晚期凋亡特征。

02

線(xiàn)粒體檢測(cè)

在細(xì)胞凋亡過(guò)程中，線(xiàn)粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔MPTP過(guò)度開(kāi)放，線(xiàn)粒體跨膜電位降低，還會(huì)導(dǎo)致一些相關(guān)的促凋亡因子，如cytochrome c、AIF、Bcl-2家族以及pro-caspase等從線(xiàn)粒體釋放到胞質(zhì)中；同時(shí)線(xiàn)粒體內(nèi)的Bcl-2家族對(duì)細(xì)胞凋亡具有雙向調(diào)節(jié)作用。線(xiàn)粒體膜通透性發(fā)生改變時(shí)，其跨膜電位降低，細(xì)胞進(jìn)入不可逆的凋亡過(guò)程。線(xiàn)粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。

03

溶酶體檢測(cè)

在特定條件下，包括活性氧、鞘氨醇、細(xì)胞凋亡效應(yīng)因子Bax等在內(nèi)的多種刺激因子均可誘發(fā)溶酶體膜通透性的改變，之后溶酶體內(nèi)含的蛋白酶(如組織蛋白酶等)及其他水解酶從溶酶體釋放至胞漿中，通過(guò)剪切效應(yīng)分子，激活包括凋亡酶在內(nèi)的其他水解酶而啟動(dòng)細(xì)胞凋亡程序的執(zhí)行。關(guān)于